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PCR實操避坑分享發(fā)布時間：2025-09-28

前段時間和大家分享了PCR反應(yīng)的過程控制，今天來聊聊PCR的操作手法。實操可以說是整個PCR實驗流程中最容易被忽略卻又至關(guān)重要的一環(huán)。下面小編就來分享一下自己當初的一些經(jīng)驗心得，僅代表個人看法。先說體系配置（各組分分開，非預混液）。配置前先計算好所需要的各組分體積，統(tǒng)一配置好后再...

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2022
4-6

程序降溫盒使用經(jīng)驗分析
程序降溫盒的使用方法直都搞不明白，覺得是不是應(yīng)該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時間(細胞剛開始還沒凍的時候就是室溫)，然后把細胞放進去，再一起移到-80度，這樣才能實現(xiàn)程序降溫呢?時間使用長了，感覺里面的液體是不是異丙醇啊，使用...
2022
3-23

三槽梯度PCR儀你真的了解嗎?
一次性PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱之為梯度PCR儀。通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進行擴增，從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的適合退火溫度進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增，這...
2022
3-16

程序降溫盒使用小技巧
程序降溫盒在沒有酒精或任何液體的情況下,能確保在低溫冰箱中樣品的降溫速率為-1℃/分鐘。它們可以運用于各種細胞類型，包括干細胞，原代細胞和細胞系。這對于大多數(shù)需要培養(yǎng)的細胞系來說是非常理想的。已經(jīng)通過干細胞，原代細胞和細胞系的使用，證明了提...
2022
3-10

迷你梯度PCR儀常用的五種分析方法
迷你梯度PCR儀的梯度溫度控制是一項可有助于PCR中引物退火優(yōu)化的功能。梯度設(shè)定的目的是在模塊之間實現(xiàn)變化的溫度，通過每列之間≥2°C的間隔溫度升降，使得可同時對于一系列的溫度進行測試以獲取引物退火溫度。該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計帶有三個或更...
2022
3-1

三槽梯度PCR儀科普知識大全，你真不一定都懂
三槽梯度PCR儀溫度的準確性可能會對PCR的成敗與否起決定性作用，因為PCR的三個主要步驟都依賴于溫度。類似地，加熱模塊上孔與孔之間的溫度一致性對于獲取可靠而可重復的PCR結(jié)果也是至關(guān)重要的。因此，所使用的PCR儀能在模塊之間準確到達設(shè)定的...
2022
1-21

雙槽梯度PCR儀應(yīng)該這樣使用
雙槽梯度PCR儀的反應(yīng)原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性一退火（復性）--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時聚合酶鏈式反應(yīng)間后，使模板DN...

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